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            人抗Sa抗體(anti-Sa-Ab)免疫組化試劑盒

            • 市場(chǎng)價(jià)格: 10
            • 產(chǎn)品型號(hào):
            • 更新時(shí)間: 2024/5/28 15:44:31
            • 生產(chǎn)地: 中國(guó)大陸
            • 訪問次數(shù): 75次
            • 公司名稱: 上海彩佑實(shí)業(yè)有限公司

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            企業(yè)檔案

            企業(yè)類型:生產(chǎn)商

            公司地址:上海市閔行區(qū)元江路5500號(hào)第一幢5658室

            主營(yíng)產(chǎn)品:Elisa試劑盒,免疫組化試劑盒,抗體,細(xì)胞,血清,生化試劑

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            我們將為客戶提供高品質(zhì)人抗Sa抗體(anti-Sa-Ab)免疫組化試劑盒和實(shí)驗(yàn)技術(shù)解決方案。豐富的經(jīng)驗(yàn)、優(yōu)良的品質(zhì)、充足的庫(kù)存、準(zhǔn)確的交貨時(shí)間、極具競(jìng)爭(zhēng)力的價(jià)格,所有這些保證了我們向您提供的最專業(yè)最優(yōu)質(zhì)的服務(wù)。所有ELISA試劑盒均以超低折扣價(jià)讓利客戶,全程免費(fèi)技術(shù)指導(dǎo),提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù),歡迎新老客戶來電咨詢。

            詳細(xì)內(nèi)容

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                       參數(shù)規(guī)格
            48孔配置/96孔配置
            人抗Sa抗體(anti-Sa-Ab)免疫組化試劑盒試劑僅供研究使用 
            標(biāo)本
            實(shí)驗(yàn)所用主要為組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本兩大類,前者包括石蠟切片(病理切片和組織芯片)和冰凍切片,后者包括組織印片、細(xì)胞爬片和細(xì)胞涂片。
            其中石蠟切片是制作組織標(biāo)本最常用、最基本的方法,對(duì)于組織形態(tài)保存好,且能作連續(xù)切片,有利于各種染色對(duì)照觀察;還能長(zhǎng)期存檔,供回顧性研究;石蠟切片制作過程對(duì)組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響,但可進(jìn)行抗原修復(fù),是免疫組化中首選的組織標(biāo)本制作方法。
            抗體
            免疫組化實(shí)驗(yàn)中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體,單克隆抗體是一個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆分泌的抗體,應(yīng)用細(xì)胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動(dòng)物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動(dòng)物后,從動(dòng)物血中所獲得的免疫血清,是多個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。
            常用染色方法
            根據(jù)標(biāo)記物的不同分為免疫熒光法,免疫酶標(biāo)法,親和組織化學(xué)法,后者是以一種物質(zhì)對(duì)某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測(cè)方法。這種方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗體)在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平的定位,其中生物素—抗生物素染色法最常用。

            工作原理:  
            人抗Sa抗體(anti-Sa-Ab)免疫組化試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11) 水平。用純化的人嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin 1 (Eotaxin 1/CCL11) 抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(Eotaxin 1/CCL11) ,再與HRP標(biāo)記的中性粒細(xì)胞 明膠酶相關(guān)
            脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(Eotaxin 1/CCL11) 抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán) 色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(Eotaxin 1/CCL11) 呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸 光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11) 濃度。  
            目的:本試劑盒用于測(cè)定人血清,血漿及相關(guān)液體樣本中中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(Eotaxin 1/CCL11) 的含量。
            操作流程
            人抗Sa抗體(anti-Sa-Ab)免疫組化試劑盒一 免疫組化(SP法)操作步驟
            1. 切片常規(guī)脫蠟至水。如需抗原修復(fù),可在此步后進(jìn)行
            2.緩沖液洗 3min/2 次。
            3. 為了降低內(nèi)源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色,將切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分鐘。
            4. 緩沖液洗 5min/2 次。
            5. 滴加 Ultra V Block , 在室溫下孵育 5 分鐘以封閉非特異性的背景染色。
            (注:孵育不要超過 10 分鐘,否則會(huì)導(dǎo)致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有 5 - 10% 正常羊血清,這一步可以省略。)
            6. 緩沖液洗 5min/2 次。
            7. 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 - 2 小時(shí)。(具體孵育時(shí)間和溫度由試驗(yàn)者最終決定)
            8. 緩沖液洗 5min/2 次。
            9 . 滴加 Primary Antibody Enhancer(增強(qiáng)子),在室溫下孵育 20 分鐘。
            10 .緩沖液洗 5min/2 次。
            11 .滴加 HRP Polymer(酶標(biāo)二抗) ,在室溫下孵育 30 分鐘。
            (注:HRP Polymer 對(duì)光敏感,應(yīng)避免不必要的光暴露并儲(chǔ)存在不透明的小瓶中。)
            12 .緩沖液洗 5min/2 次。
            13 .向 1ml DAB Plus Substrate (或 AEC Plus Substrate) 中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen (或 AEC Plus Chromogen),混勻后滴加到切片上,孵育 3 - 15 分鐘。(具體時(shí)間由染色深淺決定。)
            14 .自來水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明,封片。
            操作步驟
            ⑴、石蠟切片脫蠟至水。
            ⑵、 3%H 2 O2 室溫孵育 5-10 分鐘,以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。
            ⑶、蒸餾水沖洗, PBS 浸泡 5 分鐘 x2 (如需抗原修復(fù),可在此步后進(jìn)行)。
            ⑷、 5-10% 正常山羊血清(PBS 稀釋)封閉,室溫孵育 10 分鐘,傾去血清,勿洗。滴加 一抗 工作液, 37 ℃ 孵育 1-2 小時(shí)或 4 ℃ 過夜。
            ⑸、 PBS 沖洗, 5 分鐘 x3 次。
            ⑹、滴加適量 生物素標(biāo)記二抗 工作液, 37 ℃ 孵育 10-30 分鐘。
            ⑺、 PBS 沖洗, 5 分鐘 x3 次。
            ⑻、滴加適量的 辣根酶或堿性磷酸酶標(biāo)記的鏈霉卵白素 工作液, 37 ℃ 孵育 10-30 分鐘。
            ⑼、 PBS 沖洗, 5 分鐘 x3 次。
            ⑽、顯色劑顯色 3-15 分鐘(DAB 或 NBT/BCIP)
            ⑾、自來水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明,封片。
            化染色步驟
            冰凍切片 4-8μm ,室溫放置 30 分鐘后,入 4 ℃丙酮固定 10分鐘,PBS洗,5分鐘x3,用過氧化氫孵育5-10分鐘,消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。
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             人抗Sa抗體(anti-Sa-Ab)免疫組化試劑盒1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
              2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。 
             3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。  
            4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用 PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右 (2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。 
             5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量 的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備 用。
            6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.  
            7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 
             

            關(guān)鍵詞:人抗Sa抗體(anti-Sa-Ab)免疫組化試劑盒  

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